南京市实验幼儿园的前身是1955年在陈鹤琴先生倡导下创办的南京师范学院附属幼儿师范学校幼儿园，是一所承担培育幼儿、提供幼师学生见实习和进行教育科研的幼儿园。文化大革命期间更名为南京市代代红幼儿园；982年被江苏省教委命名为南京市实验幼儿园。
创办初期有班级4个，在园幼儿122人，教职工11人；现有班级16个，在园幼儿550人，在编教职工58人，是一所婴幼儿一体化、中外儿童一体化的全日制教办。
幼儿园环境优美，设施一流。多年来坚持“一切以儿童发展为本”的办园理念，营造和谐的教育文化环境，走内涵发展之路，以综合教育课程为载体，培养身心健康、习惯良好、兴趣广泛、思维活跃、个性活泼、具有自主创新意识、基础素质和谐发展的幼儿。实幼的综合教育课程为我国主要的幼教课程模式之一。
实幼有一支忠于事业、热爱幼儿、业务精良、师德高尚的教工队伍，他们在工作中积极进取、勇于开拓，先后有多人次分别获得全国、省、市、区各类光荣称号。
实幼是江苏省首批示范性实验幼儿园，南京市首批一类一级园，南京市模范学校，曾为国家教委实施《幼儿园工作规程》试点园。先后还获得全国“三八”红旗集体、江苏省教科研先进集体、江苏省优秀家长学校、南京市文明单位等光荣称号。